湘云鲫2号抗病能力的研究

　　本实验分别对湘云鲫2号和异育银鲫进行尾静脉采血，4℃3500r/min 离心15min，收集血清，收集血清保存于-80℃待测；经过检测，结果表明，湘云鲫2号血清中溶菌酶平均含量为0.28(ug/ml)，异育银鲫血清中溶菌酶的平均含量是0.21(ug/ml)，差异显著。湘云鲫2号血清中白蛋白含量是8.72g/L约为异育银鲫血清中白蛋白含量的2/3倍，差异显著；碱性磷酸酶含量是20.83U/L约为异育银鲫的2/3倍，差异显著；谷丙转氨酶含量是27.00U/L约为异育银鲫的1/6倍，差异极为显著；谷草转氨酶含量是231.17U/L约为异育银鲫的1/5倍，差异极为显著；在湘云鲫2号血清中肌酐的含量是1.98nmol/L约为异育银鲫的1/2倍。

　　1、试验材料和方法

　　1.1 试验材料

　　湘云鲫2号和异育银鲫分别来源于常熟市昆承湖水产有限责任公司和苏州市阳澄湖现代农业发展有限公司。湘云鲫2号体重400-500克，异育银鲫体重400-500克。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 血清溶菌酶活性测定

　　1.2.1.1 血清的制备

　　分别对湘云鲫2号和异育银鲫进行尾静脉采血，4℃3500r/min 离心15min，收集血清保存于-80℃待测。

　　1.2.1.2 溶壁微球菌应用液的制备

　　在溶菌酶标准品中加入双蒸水1ml，配成2mg/ml的标准品贮备液，4℃保存，临用前用双蒸水稀释800倍，稀释成2.5ug/ml的标准品应用液。

　　1.2.1.3 标准品的制备

　　在溶菌酶标准品中加入双蒸水1ml，配成2mg/ml的标准品贮备液，4℃保存，临用前用双蒸水稀释800倍，稀释成2.5ug/ml的标准品应用液。

　　1.2.1.4 标准品的制备

　　在溶菌酶标准品中加入双蒸水1ml，配成2mg/ml的标准品贮备液，4℃保存，临用前用双蒸水稀释800倍，稀释成2.5ug/ml的标准品应用液。

　　1.2.1.5 溶菌酶活性的测定

　　将配好的应用菌液、标准品液及所需检测的样本均放入37℃水浴箱中预温5min以上，使菌液、标准液及检测样本的温度达37℃。在分光光度计530nm 处，1cm光径比色皿，以双蒸水调透光度100%。往相应编号的试管中加入200ul待测样本或标准品，取2ml应用菌液迅速冲入试管中，立即混匀，开始计时。迅速倒入比色皿中，在530nm处比色，在5秒和2分5秒时分别读取透光值T2。按下式计算溶菌酶含量:

　　溶菌酶含量(ug/ml)=(测定透光度UT2-测定透光度UT0)/标准透光度ST2-标准透光度ST0×标准品浓度×样本测试前稀释倍数。

　　1.2.2 血清中免疫生化指标测定

　　分别对湘云鲫2号和异育银鲫进行尾静脉采血，4℃3500r/min 离心15min，收集血清，于美国雅培C-8000全自动生化分析仪上进行白蛋白、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和肌酐的测定。

　　2、检测结果

　　2.1 湘云鲫2号和异育银鲫血清溶菌酶活性

　　2.2 湘云鲫2号和异育银鲫血清中免

　　结果表明，湘云鲫2号血清中白蛋白含量约为异育银鲫血清中白蛋白含量的2/3倍，差异显著；碱性磷酸酶含量约为异育银鲫的2/3倍，差异显著；谷丙转氨酶含量约为异育银鲫的1/6倍，差异极为显著；谷草转氨酶含量约为异育银鲫的1/5倍，差异极为显著；在湘云鲫2号血清中肌酐的含量是异育银鲫的1/2倍。（表2）。

　　3、小结与讨论

　　3.1 血清溶菌酶活性

　　从表1可以得出湘云鲫2号血清中溶菌酶的平均含量0.28(ug/ml)，而异育银鲫血清中溶菌酶的平均含量是0.21(ug/ml)，差异显著。

　　3.2 湘云鲫2号抗菌能力强

　　由于湘云鲫2号血清中溶菌酶的平均含量比异育银鲫血清中溶菌酶的平均含量高，因而湘云鲫2号的抗菌能力比异育银鲫强。溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，称包胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4键，从而破坏细菌的细胞壁，使之松驰而失去对细胞的保护作用，最终使细菌溶解死亡。也可以直接破坏革兰氏阳性菌的细胞壁，而达到杀菌的作用，这主要是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由胞壁质和磷酸质组成，其中胞壁质是由杂多糖和多肽组成的糖蛋白，这种多糖正是由N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4键联结的。对某些革兰氏阴性菌，如埃希氏大肠杆菌，伤寒沙门氏菌，也会受到溶菌酶的破坏。

　　3.3 血清中各免疫生化指标的含量

　　从表2可以看出湘云鲫2号血清中各免疫生化指标的含量比异育银鲫血清中各免疫生化指标的含量低得多。免疫生化指标是动物机体受到病菌或病毒感染的免疫反应，湘云鲫2号血清中各免疫生化指标的含量比异育银鲫的低，说明湘云鲫2号抗病能力强，病菌或病毒感染少。

　　3.4 养殖情况

　　全国鲫鱼养殖看江苏省，江苏省看盐城市，盐城市鲫鱼（异育银鲫）养殖开始于上世纪90年代中期，随着养殖规模的扩大和养殖密度的增加，孢子虫病、出血病、以及最近二年的鲫鱼疱疹病毒病，造成江苏盐城地区异育银鲫养殖产业毁灭性打击。鲫鱼疱疹病毒病是目前发现的唯一感染鲫鱼（异育银鲫）的病毒性疾病，其致死率高达90%以上。该病传染性强，危害巨大，目前在我国很多省市广泛流行，已成为我国鲫鱼养殖的主要威胁。由于该病目前缺少有效的治疗药物，预防已成为唯一控制该病毒有效手段。盐城市、苏州市、常熟昆承湖最近几年开始养殖的湘云鲫2号很好的抵御了孢子虫病、出血病和鲫鱼疱疹病毒病的袭击，目前还没有发现湘云鲫2号养殖户有感染孢子虫病、出血病和鲫鱼疱疹病毒病的事例，湘云鲫2号已成为鲫鱼养殖户的新宠。